La Cromatografía de Exclusión por Tamaño (SEC) separa las moléculas según su tamaño, o más precisamente, su volumen hidrodinámico. Se basa en la discriminación de los componentes individuales de la muestra por los poros del material de empaque. Las moléculas de muestras grandes no pueden o sólo pueden penetrar parcialmente en los poros y eluir de la columna primero, mientras que las moléculas más pequeñas pueden acceder a todos o a un mayor número de poros y eluir después. La SEC es el único modo de cromatografía que no implica la interacción con una fase estacionaria por medio de la adsorción o la partición de los solutos.
Los términos SEC, GFC (cromatografía de filtración en gel) y GPC (cromatografía de permeación en gel) se refieren a la misma técnica cromatográfica. En el GFC se utiliza una fase móvil acuosa, mientras que en el GPC se emplea una fase móvil orgánica. El término general SEC abarca ambos usos.
La separación en la cromatografía de intercambio iónico (IEC o IEX) se basa en la adsorción reversible de moléculas de solutos cargados a grupos funcionales inmovilizados de carga opuesta. Las biomoléculas generalmente tienen grupos cargados en sus superficies, que cambian con el pH del tampón. La elución puede lograrse cambiando la fuerza iónica o el pH, de los cuales el cambio de la fuerza iónica mediante el aumento de la concentración de sal es el más común.
El IEX se subdivide además en cromatografía de intercambio catiónico y de aniones. Las fases de intercambio de aniones y cationes se clasifican como fuertes o débiles, dependiendo de cuánto varíe el estado de ionización de los grupos funcionales con el pH. Una fase de intercambio iónico fuerte tiene la misma densidad de carga en su superficie a lo largo de una amplia gama de pH, mientras que la densidad de carga de una fase de intercambio iónico débil cambia con el pH, lo que afecta a su selectividad, que difiere en los diferentes valores de pH.
La cromatografía líquida de fase inversa (RPC) se ha convertido en una herramienta aceptada para la separación de péptidos, proteínas y otros biopolímeros en las industrias farmacéutica, química y bioquímica.
La cromatografía líquida de fase inversa (RPC) separa moléculas basadas en interacciones no polares y requiere una fase móvil polar, normalmente una mezcla de agua o solución tampón con eluyentes polares como el metanol, el acetonitrilo o el tetrahidofurano, y una fase estacionaria no polar como hidrocarburos de cadena larga unidos a un soporte de sílice o híbrido.
La cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC) se basa en las interacciones no polares que son inducidas por fases móviles de alta salinidad. Las fases estacionarias son similares a la Cromatografía de Fase Reversa (RPC), pero la densidad de los grupos funcionales es menor. Se utiliza una fase estacionaria débilmente no polar con una fase móvil acuosa que contiene una alta concentración de una sal caótropa.
La técnica se aplica principalmente a la separación de proteínas, que se eluyen disminuyendo la concentración de sal o añadiendo un bajo porcentaje de disolvente orgánico. Aunque también se basa en interacciones hidrofóbicas, la selectividad en las separaciones de HIC es claramente diferente de la de la cromatografía de fase reversa. A pesar de la menor capacidad de pico en la HIC en comparación con la RPC, la HIC permite mantener la estructura nativa de la proteína, que resulta útil en los análisis posteriores.
Las columnas TSKgel FcR-IIIA se basan en un receptor Fc gamma IIIA recombinante que se inmoviliza como ligando en partículas de polímero. Separan los anticuerpos monoclonales según su afinidad al receptor y permiten un análisis rápido de la actividad biológica, así como el fraccionamiento junto con la actividad biológica.
La cromatografía acuosa de exclusión por tamaño (SEC) es un método establecido para el análisis de proteínas y anticuerpos monoclonales, incluyendo fragmentos, monómeros y agregados en condiciones no desnaturalizantes.
Las columnas de la serie TSKgel SW han sido los caballos de batalla de la industria para el análisis SEC de los bioterapéuticos durante décadas. Las columnas TSKgel UP-SW3000-LS son la última incorporación a esta reconocida familia de columnas.
Las columnas TSKgel UP-SW3000-LS ofrecen una alta resolución, una forma de pico nítida y una alta eficiencia, dando lugar a métodos robustos, reproducibles y fácilmente transferibles entre sistemas UHPLC y HPLC.
Estas columnas de U/HPLC proporcionan niveles de ruido significativamente más bajos que otras columnas cuando se combinan con detectores avanzados, acortando el tiempo de equilibrio y mejorando la calidad de los datos. En las aplicaciones de dispersión de luz multiángulo, las columnas con bajos niveles de ruido ofrecen una elevada relación señal/ruido, lo que mejora la sensibilidad de la detección.
En las aplicaciones de espectrometría de masas, las columnas de baja dispersión aumentarán la eficacia de la ionización por electrospray y mejorarán el rendimiento general de la EM y el tiempo de funcionamiento del instrumento.
