Prueba NIST para caracterización de rellenos por UHPLC
La prueba NIST utiliza una mezcla de cinco componentes orgánicos (uracilo, tolueno, etilbenceno, quinizarina y amitriptilina)
El análisis detallado de los diferentes picos obtenidos permitirá una evaluación objetiva y, lo que es más importante, estandarizada del comportamiento del empaquetamiento cromatográfico y por tanto anticipar su idoneidad en el trabajo analítico normal.
El uracilo es un indicador de volumen muerto de la columna (pico no retenido)
El Tolueno/Etilbenceno el factor de selectividad entre estos dos compuestos se puede utilizar para caracterizar las diferencias entre rellenos debido principalmente a interacciones hidrofóbicas.
La quinizarina mide la actividad hacia los reactivos quelantes.
La amitriptilina mide la actividad hacia las bases. Es un excelente indicador de la actividad de los silanoles residuales de la superficie del relleno
La columna mediterránea Sea 18 sometida a la prueba SRM870, diseñada por la NIST, está considerada actualmente como la más recomendada para evaluar las propiedades más significativas de una columna de fase reversa.
La silica de la mediterránea Sea 18 está formada por partículas perfectamente esféricas, un diseño de poros totalmente controlado, una ausencia total de trazas metálicas, un estudiado proceso de ligado de fase y de endcapping da como resultado un relleno con una resistencia a pH extremos no alcanzado hasta ahora.
Las columnas con rellenos mediterranea ™ sea18 le permite trabajar con eluyentes de pH 1 a pH 12. Estos valores tan inusuales de resistencia se han conseguido gracias a la eficacia de los procesos de ligado y endcapping diseñados, que le confieren una estructura protectora a modo de cápsula que dificulta el acceso de los eluyentes a la superficie de la sílice, quedando protegida frente a los ataques ácidos o básicos
Los gráficos de estabilidad del pH muestran la eficiencia del proceso.
Con un eluyente a PH 1, la columna se estabiliza en un breve período de tiempo para que incluso sea posible trabajar en estas condiciones extremas.
Se pasa por la columna un eluyente ACN/TFA 1% pH 1.0 (10:90) 1ml/min a 25ºC. Cada cierto tiempo se comprueba con el test de fase reversa y se compara la retención del ultimo pico antraceno
Eluir la columna mediterranea ™ sea18 durante 78 horas a pH 11,5, no mostró un deterioro significativo en términos de eficiencia y simetría de pico para difenhidramina.
El relleno mediterranea sea18 es un relleno 100 % puro de fase reversa con la ventaja adicional de que presenta una excelente retención de compuestos polares y además permite trabajar con fases móviles 100% acuosas sin ninguna limitación.
Es sabido que los rellenos conocidos como “polar embedded” presentan en principio la ventaja sobre los rellenos convencionales, ya que pueden trabajar en medios 100% acuosos y además muestran un buen comportamiento frente a compuestos básicos.
Sin embargo, estas ventajas se logran a expensas de una menor retención de compuestos polares y una menor estabilidad de la columna, y de un comportamiento cromatográfico que no puede considerarse 100% fase reversa, puesto que pueden coexistir mecanismos de interacción secundaria que vendrán marcados por la especial naturaleza de los grupos funcionales polares anclados en la base de las cadenas hidrocarbonadas
El relleno mediterranea sea18 supera ampliamente todas las ventajas de los rellenos “polar embedded” y no muestra ninguno de sus inconvenientes. Además, gracias a su especialmente optimizado proceso de endcapping (MED) se garantiza una extremada resistencia y vida útil de a columna.
Como puede observarse, los cromatogramas que se obtienen después eluir la columna con 100% de agua durante más de 40 horas, no muestra alteración apreciable en los tiempos de retención ni en la eficacia de los picos cromatográficos
La columna mediterranea ™sea18 también supera ampliamente el test de” Stop Flow”, diseñado para poner en evidencia el fenómeno de “deweting” que suele producirse en las columnas del tipo ODS altamente desactivadas y que consiste en la expulsión irreversible del agua incluida en los poros del relleno.
En la tabla se muestra los tiempos de retención para diferentes picos cromatográficos antes y después de pasar el test de “Stop Flow”. Después de 5 ciclos consecutivos no se observan alteraciones significativas de los tiempos de retención.
